免疫疗法已成为肿瘤治疗中的热点话题，其核心在于肿瘤细胞可产生特异性或相对特异性的抗原，以此诱发机体产生免疫反应。其中，肿瘤特异性抗原（如“肿瘤新抗原”）是目前个体化免疫治疗中最为引人注目的靶点。如何快速、简易地鉴别不同患者所表达的肿瘤特异性抗原是大部分免疫疗法实施的第一步。
在较为传统的方案中，通常使用血清抗体进行肿瘤抗原鉴定，然而，特异性抗体在血液中被大量稀释、形成免疫复合物等情况会降低检测的敏感性和特异性。虽然，蛋白微阵列的抗体谱分析在一定程度上提高了该策略的敏感性和可重复性，但依旧可以通过选择更为优质的抗体对该策略进行更进一步的优化。
2019年11月，一篇发表于《Cancers》的文章介绍了一种优化方案——使用乳腺癌患者的局部引流淋巴结中抗体分泌细胞（ASC）产生的抗体作为探针，检测了不同患者的抗体对乳腺癌细胞系的反应。结合蛋白微阵列技术，对患者体内的抗体谱进行了分析。
临床发现，即使肿瘤细胞没有转移，乳腺癌患者的局部淋巴结也通常会出现肿大，这与机体的主动免疫反应有关。这些引流淋巴结中往往含有较多的生发中心和分泌IgG的B细胞。更关键的是，这些B细胞的部分特性往往与患者的生存期相关。鉴于先前已有研究发现，淋巴结细胞的短期培养可以促使其释放抗体，并且这些抗体反映了目标组织中存在的抗原库。
基于以上两点，作者获取了20例乳腺癌患者局部引流淋巴结，并对淋巴结中的抗体分泌细胞（antibody-secreting cells，ASC）进行短期培养，分离了上清液存在的抗体，称为ASC探针。
首先，作者检测了来源于不同患者的ASC探针对乳腺癌MCF-7细胞提取物的反应性。Western Blot的结果显示10种ASC探针与MCF-7细胞提取物有着很强的反应性。并且，除了两种来源于多灶性肿瘤患者的探针外（ASC20，ASC15），其余探针对肿瘤细胞可溶性部分的反应水平较不溶性部分更高。
随后，作者使用定制的蛋白微阵列对患者的抗体谱进行分析。10种探针中，有3种探针具有阳性反应，其对应的特异性抗原包括癌-睾抗原（cancer-testis antigen，CTAG）家族的成员，以及磷酸肌醇-3-激酶调节亚基1（Phosphoinositide-3-Kinase Regulatory Subunit 1，PIK3R1）。
图. 10种强反应ASC探针与相应血清/血浆的蛋白质微阵列筛选（源于文献）
DDX53，DEAD-box解旋酶53；FTHL17，重多肽样铁蛋白17，FTHL17；MAGEA4，黑色素瘤相关抗原4
作者通过以上试验表明，仅需短期培养乳腺癌患者的局部淋巴结细胞，便可从培养的上清液中获得针对肿瘤抗原的特异性抗体，这将大大简化特异性抗体探针的生产过程。并且，部分免疫原性较差的乳腺癌患者体内也可以通过该方案检测出相应抗体。在与微阵列结合后，便能分析出抗体所针对的肿瘤特异性抗原。因此，该策略在一定程度上可以更快地鉴定肿瘤抗原，为个性化的肿瘤免疫治疗提供了新的标志物。
感想：肿瘤新抗原的筛选是免疫治疗需要攻克的一个难题，在肿瘤疫苗的制备方面更是重中之重。上述文章中的方案有可能成为一种快速简便的新抗原筛选策略，即将预测的肿瘤新抗原（如来源于单个碱基突变、移码突变等）进行人工合成，制作成蛋白微阵列，随后使用患者局部引流淋巴结来源的抗体进行检测，以此来初步判断预测突变作为个体化肿瘤疫苗的可行性。
撰写：高原 （南京大学医学院附属鼓楼医院肿瘤中心）
修改：刘宝瑞（南京大学医学院附属鼓楼医院肿瘤中心 主任医师 教授 博导）
文献资料：
Young, A.R., et al., Immunoprofiling of Breast Cancer Antigens Using Antibodies Derived from Local Lymph Nodes. Cancers, 2019. 11(5).
南京大学鼓楼医院肿瘤中心 主任医师 教授
专注于肿瘤个体化及靶向药物治疗
新抗原疫苗及靶向免疫治疗
精准放疗及中西医结合治疗
原文始发于微信公众号（刘宝瑞肿瘤医疗网络平台）：抗原筛选新策略：以肿瘤引流淋巴细胞的抗体为探针
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